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Tris-MgCl2解離液 提供優(yōu)惠高品質(zhì)試劑
產(chǎn)品名稱： Tris-MgCl2解離液
規(guī)格：100ml
用途：分離細(xì)胞核
注意事項(xiàng)：主要由Tris、氯化鎂、曲拉通等組成。
儲(chǔ)存條件：4℃,6個(gè)月
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重組DNA的轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增(轉(zhuǎn)):將重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行增殖或表達(dá)。重組質(zhì)?？赏ㄟ^轉(zhuǎn)化方式導(dǎo)入宿主細(xì)胞,λ噬菌體作為載體的重組體,則需通過轉(zhuǎn)染方式將重組噬菌體DNA導(dǎo)入大腸桿菌等宿主細(xì)胞。重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞后,即可在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)以擴(kuò)增宿主細(xì)胞。
重組DNA的篩選和鑒定(篩):對(duì)含有重組體的宿主細(xì)胞進(jìn)行篩選并作鑒定。
⑴根據(jù)重組體的表型進(jìn)行篩選:對(duì)于帶有抗藥基因的質(zhì)粒重組體,可采用插入滅活法進(jìn)行篩選。
⑵根據(jù)標(biāo)志互補(bǔ)進(jìn)行篩選:當(dāng)宿主細(xì)胞存在某種基因及其表達(dá)產(chǎn)物的缺陷時(shí),可采用此方法篩選重組體。即在載體DNA分子中插入相應(yīng)的缺陷基因,如宿主細(xì)胞重新獲得缺陷基因的表達(dá)產(chǎn)物,則說明該細(xì)胞中帶有重組體。
⑶根據(jù)DNA限制酶譜進(jìn)行分析:經(jīng)過粗篩后的含重組體的細(xì)菌,還需進(jìn)行限制酶譜分析進(jìn)一步鑒定。
⑷用核酸雜交法進(jìn)行分析鑒定:采用與目的基因部分互補(bǔ)的DNA片段作為探針,與含有重組體的細(xì)菌菌落進(jìn)行雜交,以確定重組體中帶目的基因。獲得帶目的基因的細(xì)菌后,可將其不斷進(jìn)行增殖,從而得到大量的目的基因片段用于分析研究。如在目的基因的上游帶有啟動(dòng)子順序,則目的基因還可轉(zhuǎn)錄表達(dá)合成蛋白質(zhì)。
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