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測(cè)定意義

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測(cè)定SBE活性在淀粉生物合成、農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。

測(cè)定原理

淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收，SBE可切斷支鏈淀粉側(cè)支，從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值，一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

需自備的的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2支，4℃保存；臨用前每支加入1mL雙蒸水，充分溶解后備用；

試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取

稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。15000g ，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

混勻，37℃準(zhǔn)確保溫20 min，置沸水浴中1 min終止反應(yīng)（蓋緊防止水分散失），冷卻

混勻，室溫靜置10min，用蒸餾水調(diào)零，660nm處讀取各管吸光值。

注意：

1、可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行1min沸水浴處理。

2、試劑一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。

SBE活力單位的計(jì)算

方法（一）按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：以波長(zhǎng)660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在反應(yīng)體系中每降低1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

1. 活性（U/mg prot）=（A對(duì)照管-A測(cè)定管）/A對(duì)照管÷蛋白濃度(mg/mL) ×100

方法（二）按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：以波長(zhǎng)660nm的吸光度下降百分率表示，每g組織在反應(yīng)體系中每降低1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE活性（U/g 鮮重）=（A對(duì)照管-A測(cè)定管）/A對(duì)照管÷樣本鮮重(g/mL) ×100

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