上海信帆生物提供Western Blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

Western blot簡(jiǎn)介    蛋白質(zhì)印記又稱印記，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)樣品中的某種蛋白的方法。它是利用特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色，通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。 Western blot的原理    Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。    以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。Western blot樣本要求客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測(cè)目的蛋白的一抗（或由本公司代購(gòu)）。樣品要求為： 1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。 Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括整個(gè)試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測(cè)報(bào)告Western blot實(shí)驗(yàn)服務(wù)服務(wù)內(nèi)容我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測(cè)的全流程服務(wù)，如需要還可進(jìn)行灰度分析。說(shuō)明1、建議提供目的蛋白陽(yáng)性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽(yáng)性對(duì)照。2、每張膜檢測(cè)1-8個(gè)樣品。3、如果一抗由客戶提供，請(qǐng)?jiān)谡_條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。

Western Blot實(shí)驗(yàn) 免疫印跡實(shí)驗(yàn)免疫反應(yīng)：

1. 用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。

2. 加入包被液，平穩(wěn)搖動(dòng)，室溫2hr。

3. 棄包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。

4. 加入一抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部），4℃ 放置12hr以上。陰性對(duì)照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實(shí)驗(yàn)組相同。

5. 棄一抗和1%BSA，用0.01M PBS分別洗膜，5min×4次。

6. 加入辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋），平穩(wěn)搖動(dòng)，室溫2hr。

7. 棄二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。

8. 加入顯色液，避光顯色至出現(xiàn)條帶時(shí)放入雙蒸水中終止反應(yīng)。

四、Western Blot實(shí)驗(yàn) 免疫印跡實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、Western Blot實(shí)驗(yàn)免疫印跡實(shí)驗(yàn)一抗、二抗的稀釋度、作用時(shí)間和溫度對(duì)不同的蛋白要經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定*條件。

2、Western Blot實(shí)驗(yàn)免疫印跡實(shí)驗(yàn)顯色液必須新鮮配置使用，zui后加入H2O2。

3、Western Blot實(shí)驗(yàn)免疫印跡實(shí)驗(yàn)DAB有致癌的潛在可能，操作時(shí)要小心仔細(xì)。

 尊敬的客戶：本公司有放射技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以咨詢上海信帆生物科技有限公司，了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無(wú)止境的追求，歡迎新老客戶放心選購(gòu)自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)！

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