白介素Elisa試劑盒操作步驟

更新時(shí)間：2017-04-19

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白介素Elisa試劑盒操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37溶解）；試劑或樣品配制時(shí)均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100（臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37溫育1小時(shí)。

3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4、每孔加檢測(cè)溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時(shí)。

5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6、每孔加底物溶液90，酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。

7、每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度（OD值）。

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